A proposta visa elucidar os correlatos fisiológicos de resistência e susceptibilidade de bovinos e modelos experimentais infestados, respectivamente, com Boophilus microplus ou Rhipicephalus sanguineus. Serão descritos por meio de abordagens imunológicas e histológicas convencionais e por meio de abordagens de genética funcional.

Visa descobrir antígenos candidatos a vacinas por meio da varredura de bibliotecas de expressão de cDNA e de proteomas com anticorpos e linfócitos T de animais resistentes. Desenvolverá ESTs convencionais e ORESTES de pele e leucócitos com vistas ao uso em “arrays” de DNA para perfilamento de genes expressos em animais resistentes e suscetíveis. As Figuras 7 a 9 esquematizam a metodologia empregada.

Análise em massa do perfil de expressão de genes no carrapato.

Ferramenta:ESTs

O Genoma Carrapato emprega a ferramenta dos ESTs:

São seqüências parciais de genes expressos por tecidos do carrapato, obtidas rapidamente por meio de sequenciamento automático em massa de clones de uma biblioteca de DNA.

Bibliotecas são formadas por DNA complementar (cDNA) e armazenam TODOS os genes expressos por um tecido de interesse.

As ferramentas de bioinformática as ESTs tornam muito informativas (Figura 10).

A FUNÇÃO do produto de um EST é inferido por meio de análise comparativa com informações já depositadas num banco internacional de dados. Esse banco contém milhões de seqüências de genes e proteínas de microorganismos, plantas e  animais.

Resultados esperados

A obtenção de correlatos imunes de resistência ao carrapato permitirá o direcionamento imunobiológico de vacinas com delineamento de especificações dos mecanismos efetores. O reconhecimento seletivo de antígenos por animais imunes, naturalmente resistentes, e a varredura de transcriptomas e proteomas do carrapato otimizará a descoberta de antígenos.

Resultados já alcançados

• Transcriptoma de ovário e glândula salivar de Boophilus microplus sob avaliação em massa

• >1000 clones sequenciados - dezenas de genes de interesse farmacológico e imunobiológico

• 5 proteínas salivares reconhecidos exclusivamente por bovinos resistentes

Bibliotecas de expressão para clonagem de expressão:

• ovário e glândula salivar de fase de ingurgitamento rápido previstas órgão de Gené e hemócitos.

O Quadro 2 apresenta alguns genes de interesse já descobertos pelo Projeto e o possível papel de seus produtos na biologia do carrapato.

Quadro 2

Fig. 7, Fig. 8 e Fig. 9

Fig. 10